恶性疟/间日疟抗原检测试剂盒（胶体金法）

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韩国SD 恶性疟/间日疟抗原检测试剂盒（胶体金法）

广州健仑生物科技有限公司

恶性疟、间日疟、三日疟及卵形疟的四种疟疾检测试剂盒

疟疾（疟原虫）抗体、抗原、ELISA检测试剂、疟疾（疟原虫）快速检测试剂盒、疟疾（疟原虫）核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

非洲工作、旅游疟疾（疟原虫）检测试剂盒

【包装规格】疟疾疟原虫抗原检测试剂使用说明书

25人份/盒

保质期：2年

本试剂盒主要是采用胶体金层析的原理制成，用于检测人体血清/血浆/全血标本中，感染的疟原虫抗体，包括了恶性疟原虫和间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫共有抗原的鉴别性检测。

1 撕开检测卡铝箔袋，取出袋内金标卡。注意：不要让袋内材料暴露于高温高湿环境，撕开铝箔袋后尽快使用。

2将金标卡平放在台面上；并将病人名字和编号写在标签上。

3 取5微升(吸管*刻度处)全血标本，垂直加入金标卡上“加样孔A”内。

4 掰断裂解液瓶子盖子上方的绿色圆头，在“样品孔B”上垂直滴加4滴裂解液。

5 在十五分钟内出结果。注意：必须在15分钟内判读结果，如超时判断，结果无效。

6 请遵循相关法规，妥善处理样本及废弃材料。

7 存储条件：2-30℃；

8 保质期：18个月；

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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韩国SD 恶性疟/间日疟抗原检测试剂盒（胶体金法）

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一、材料
1、超纯壳聚糖盐酸盐（chitosan (CS) hydrochloride salt，Protasan UP CL 113, MW 125 kDa, acetylation degree of 14%）购自Novamatrix (Sandvika, 挪威)；
2、Miglyol 812 (M812)是一种中性油，其成份是由中链脂肪酸（6-8 C）组成的甘油三酯，M812是由Sasol Germany GmbH (Witten, Germany)捐赠；
3、乳化大豆L-α-卵磷脂（The emulsifier soybean L-a-lecithin）Epikuron145V由Cargill (Barcelona，西班牙)惠赠；
4、重组乙肝病毒表面抗原（rHBsAg或HB）(MW 24 kDa)由Shantha生物技术公司（Hyderabad，印度）惠赠，抗原蛋白溶于PBS中，蛋白浓度为0.16 mg/ml。
二、溶剂置换法制备壳聚糖纳米微囊（CSNC）
按文献（Prego C, et al. Chitosan nanocapsules as carriers for oral peptide delivery: Effect of chitosan molecular weight and type of salt on the in vitro behaviour and in vivo effectiveness. J Nanosci Nanotechnol. 2006,6: 2921–2928.）的方法进行。
简言之，将40mg和0.25mL M812溶解在乙醇与丙酮的混合液中。将此有机相倒入含0.05% CS的水溶液中，并不断进行磁力搅拌，就形成了CSNC，溶液外观呈乳白色。然后，在真空下将有机溶剂蒸发。溶液在15oC，42000g超速离心1小时，就得到CSNC悬液。后，CSNC悬液用水稀释到CS的终浓度为1 mg/mL。
Briefly, 40 mg and 0.25 mL of M812 were dissolved in a mixture of ethanol and acetone. This organic phase was poured under magnetic stirring upon an aqueous solution composed of CS 0.05% in water. CSNC were immediately formed, as noted by the milky appearance of the resulting solution. Then, the organic solvents were evaporated under vacuum. Finally, CSNC suspension was isolated by ultracentrifugation (OptimaTM L-90K Ultracentrifuge, Beckman Coulter; Fullerton, CA) at 42000xg for 1 hour at 15oC and then resuspended in water to a final concentration of CS in the formulation of 1 mg/mL.
终制备的CSNC含有由Miglyol 812 (M812)组成的油性核、卵磷脂壳和CS壳的球形结构，表面呈正电荷。CSNC的粒径约为200nm。 

三、制备携带乙肝病毒表面抗原的壳聚糖纳米微囊及其理化特性研究。
将HB抗原组装到CSNC的表面是由强的静电相互作用实现的， 因为CSNC表面是带正电荷的多糖，而抗原粒子带负电荷（水溶液中为220mV）。为了实现这一目的，对HB储存液进行脱盐，并通过超滤的方法浓缩到浓度为0.5 mg/mL。处理后的HB溶液立即与CSNC（CS的浓度为1 mg/mL）混合，室温作用1h。通过2种不同的方法：（1）增加抗原量（25、50、100、250 mg）；（2）维持恒定的抗原量（25 mg），但是改变CSNC的浓度。从而可以制备出不同比例的纳米系统，CSNC:HB的比例从1:0.025到1:12.8不等。
CSNC结合HB抗原后，粒径约为250nm。
四、对结合到CSNC表面的HB抗原进行定量
通过间接方法对结合到CSNC表面的HB抗原进行定理。超速离心 (42000 g，1h，15oC) 后，用ELISA方法检测上清中的HB抗原量，从而计算出结合到CSNC表面的HB抗原。
五、HB-CSNC的稳定性
1、将HB-CSNC悬浮液放置于4oC。每隔1周取样进行检测，共检测时长为1个月。
2、冻干保存HB-CSNC。利用冷冻干燥法来增加HB-CSNC的稳定性。HB-CSNC以不同的糖作为冻干保护剂（蔗糖和海藻糖），浓度分别为0、1、2.5、5%。HB-CSNC悬浮液和冻干保护剂溶液中按1:1（体积比）混合，分装在5毫升冻干玻璃小瓶中。小瓶中在-20oC缓慢冻结，然后放置-35oC冷冻。在此温度下在高真空中进行初步干燥（升华）反应约40小时。第二步干燥（水分解吸）持续8小时，在真空状态下温度逐渐上升至20oC。终的冻干品用超纯水温和混合悬浮并分析其物理化学性质。
结果表明：低浓度的糖（0、1、2.5%）作为冻干保护剂，溶解后纳米粒子的粒径显著增大，而5%浓度的糖作为冻干保护剂，溶解后纳米粒子的大小与冻干明相似，没有显著差异。
海藻糖（Trehalose）通常是*的生物大分子冻干保护剂，因为它的低吸湿性、容易形成更灵活的氢键和非常低的反应性。由于HB-CSNC疫苗中，HB抗原暴露在表面，因此本研究选择海藻糖作为HB-CSNC的冻干保护剂。