己烯雌酚类的残留检测试剂盒使用说明书

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己烯雌酚类的残留检测试剂盒使用说明书

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己烯雌酚类的残留检测试剂盒使用说明书

 1 原理及用途

己烯雌酚是甾类同化激素，被大量用于促进反刍动物的生长。但由于己烯雌酚存在明显的致癌性，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。我国农业部第235号文件中规定，动物源性食品中己烯雌酚的残留*为不得检出。

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织样本中的己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的己烯雌酚和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗己烯雌酚抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含己烯雌酚含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中己烯雌酚的残留量。

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)  

2.2 反应模式：25℃，30min～30min～15min

2.3 检测下限：

组织（虾、鱼）………………………0.2ppb

猪肉/肝、鸡肉/肝……………………0.5ppb

2.4 交叉反应率：

己烯雌酚………………………………100%

双烯雌酚………………………………38.5%

己烷雌酚………………………………8.5%

己炔雌二醇……………………………<0.1%

雌三醇…………………………………<0.1%

 2.5 样本回收率：

组     织   ……………………… 85%±10%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准品：各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

高标准液：100ppb…………………1ml

酶标记物（红盖）…………………11ml

抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

说明书………………………………1份

5.3.1 组织（鸡、鸭、猪肉/猪肝、虾、鱼)样本处理方法 

1）称取2±0.05g匀浆后的样本，加入6ml乙腈-丙酮混合液，振荡2min，15℃4000r/min离心10min；

2）取3ml上清液，60℃氮气/空气吹干；

3）加入0.5ml（三氯甲烷），振荡20s，加入2ml 2M NaOH，振荡30s，4000r/min离心5min；

4）取上清液1ml，加入200µl 6M H₃PO₄，振荡5s；

5）加入3ml乙腈萃取，振荡2min，室温4000r/min离心10min，取1.5ml上层有机相，60℃氮气/空气吹干；

6）不同样本按如下方法复溶：

A）虾鱼：用1ml 40%甲醇溶液溶解干燥的残留物，振荡混匀30s。取50ul用于检测。

    样本稀释倍数：4   检测下限：0.2ppb

B）猪肉/肝、鸡肉/肝：用2.5ml 40%甲醇溶液溶解干燥的残留物，振荡混匀30s。取50ul用于检测。

    样本稀释倍数：10    检测下限：0.5ppb

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。

8 注意事项

8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

8.3 混合要均匀，洗板要*，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的*性。

8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。

8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。

8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。

9 贮藏及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

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