西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒
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西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒，2002年8月2日,美国南部路易斯安那政府宣布全州进入紧急状态,控制正在该州迅速扩散的“西尼罗河病毒“。
- 产品描述
西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒
广州健仑生物科技有限公司
检查
1.实验室检查
白细胞数减少，脑炎型者脑脊液中淋巴细胞增多，蛋白增高。
2.免疫学检查
利用血清学抗体检测方法，常用ELISA（酶联免疫吸附实验）法，采用患者急性期和恢复期双份血清，两份血清同时进行检测，以恢复期血清较急性期特异性IgG抗体滴度升高4倍以上为阳性，有助于本病的诊断。
3.病原学检查
自潜伏末期至发病后第5天，从患者血液或脑脊液中分离出病毒，阳性率较高，对新分离病毒的鉴定一般采用已知血清进行中和实验。
4.分子生物学检查
RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）法检测，通过设计西尼罗河热病毒特异引物对血清或脑脊液标本进行RT-PCR试验，阳性率高，具有特异性诊断价值。
用途
西尼罗(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒，不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。
概述
感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病，西尼罗病毒在世界广泛传播，已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原，它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标，WNRA蛋白是一种重组抗原，它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。
实验的原理
检测西尼罗病毒IgG ELISA 是基于两步夹心法原理制造的。
提供的材料
- 微孔板（96孔 12x8）：即用 每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2－8℃下保存至保质期。
注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。
- IgG样品稀释液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
- IgG阴性质控：1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
- IgG阳性质控：1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
- 洗涤液（10X）：1瓶 120ml 2－8℃下保存至使用。
- EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
- 酶联物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
- TMB底物液： 1支 9ml 即用 2－8℃下保存至使用。
- 终止液；1支6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
试剂应避免反复冻融。
西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒
操作步骤：
- 标记将要使用的板条，注意微孔板已经按照统一排列，如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。
西尼罗抗原 |
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板条＃1 | 板条＃2 | |
A | WNRA | WNRA |
B | WNRA | WNRA |
C | WNRA | WNRA |
D | WNRA | WNRA |
E | NCA | NCA |
F | NCA | NCA |
G | NCA | NCA |
H | NCA | NCA |
- 将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样每孔加入50ul稀释后的样品，以下为一个血清样品使用一个板条的*。
- 品稀释液按1：300稀释。
| 板条1 | 板条2 | |
血清样品 | |||
A | IgG N | 样品1 | |
B | IgG N | 样品1 | |
C | IgG P | 样品2 | |
D | IgG P | 样品2 | |
E | IgG P | 样品2 | |
F | IgG P | 样品2 | |
G | IgG N | 样品1 | |
H | IgG N | 样品1 | |
- 封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
- 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
- 在每孔中加入50ul的酶联物。
- 封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
- 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
- 每孔加入150ul的EnWash，在室温下温育5分钟
- 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
- 每孔加入75ul的TMB底物液。
- 封板，在室温下，避光处温育10分钟。
- 每孔加入50ul的终止液终止反应。
- 在450nm处读取吸光率。
结果的计算
结果的变化将会非常大，以下结果仅供指引。
计算ISR值：
计算在同一实验里WNR抗原的两个阴性质控的平均值，计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值，用WNRA/NCA，得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值，阳性质控的ISR值应高于3.0，阴性质控的ISR值应低于1.5。
结果的判断：
ISR | 结果 | 解释 |
≤2.0 | 阴性 | 没有检测到IgG抗体 |
2.0－3.0 | 可疑 | 需确证实验 |
≥3.0 | 阳性 | 存在IgG抗体，建议做确定性实验 |
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若于液体培养基中培养24h，呈均匀混浊，后期 可因产生自溶而变得澄清。甲型溶血性链球菌不产生自溶 酶，故加入胆盐等表面活性剂不能溶解，利用此特点可鉴 别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌。肺炎链球菌在血琼脂 平板上菌落周围形成α溶血环。细菌生长的能量来源于分 解葡萄糖，伴随乳酸的形成。乳酸的堆积会抑制细菌的生 长，故间断性加入碱可使肺炎链球菌大量繁殖。Optochin 可抑制肺炎链球菌生长。该菌可分解多种糖类，产酸不产 气。胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。大多数 新分离出的肺炎链球菌可发酵菊糖，故菊糖发酵试验在鉴 别肺炎球菌与甲型溶血性链球菌时有一定的参考价值。抗 原构造编辑荚膜多糖抗原存在于肺炎链球菌荚膜中。根据 荚膜多糖抗原性的不同将肺炎球菌分为91个血清型。菌体 抗原⑴C多糖：存在于肺炎链球菌细胞壁中，具有种特异性 ，为各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反应蛋白沉淀。 在钙离子存在时，C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白 （C reactive protein,CRP）的β球蛋白结合，发生沉淀 。⑵M蛋白：具有型特异性。
