肠侵袭性大肠杆菌核酸检测试剂盒

肠侵袭性大肠杆菌核酸检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

产品规格：48T/盒；

 保存条件：避光 -20度 保存。

    我司提供各种流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、轮状病毒、杆菌、链球菌、热带病毒等等核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法），还有各种原料和质控品，随时欢迎您的来电：  杨

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以下是我司提供的部分PCR产品

肠侵袭性大肠杆菌核酸检测试剂盒

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1）用3%双氧水浸泡真空转移仪后，用DEPC水冲洗。
2）用RNAZap擦洗多孔渗水屏同胶屏，用DEPC水冲洗二次。
3）链接真空泵同真空转移仪，剪取一蚊适当大小嘅膜（膜嘅四边缘应大于胶屏孔口嘅5mm），膜喺Transfer buffer浸湿五分钟之后，放置喺多孔渗水屏嘅适当位。
4）起上胶屏，打上外框，扱上锁。
5）将胶嘅多余地方切除，切后嘅胶四边缘要可以打过胶屏窿，并zui低限打过边缘约2mm，以防止漏气。
6）将胶小心放置喺膜嘅上面，膜与胶之间唔可以有气泡。
7）打开真空泵，令压强维持得喺50~58mbar；即刻将transfer buffer加到胶面同周围。每隔10min喺胶面加埋1ml transfer buffer，真空转移2个钟。
8）转膜后，用镊子撷住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中细仔沟洗十秒，抹得甩残余嘅胶同盐。
9）用嗍水纸吸取膜上多余嘅液体之后，将膜置于UV交联仪中自动交联。
10）将胶同紫之外，交联后嘅膜，喺紫之外，灯下检测转移效率。（逃过咁长嘅紫之外，曝光时间）
12）将膜喺-20℃保存。
7.探针嘅制备
1）喺1.5ml离心理中配制以下反应液：
模板DNA（25 ng）1ul
Random Primer 2ul
灭菌水11ul
总体积：14ul
2）95°C.加热3分钟之后，快手放置于冰冷却5min。
3）喺离心理中按下列顺序加以下溶液：
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4）捞匀后（25ul），37°C.下反应半个钟。短暂离心，有冇收集溶液到理底。
5）65°C.加热5min令酵素失工作。
8.探针嘅纯化同过活性测定：
1）准备凝胶：将1g凝胶加30ml嘅DEPC水中，浸泡过夜。用DEPC水洗涤膨胀嘅凝胶数次，以除去可溶解嘅葡聚糖。换用新配制嘅TE（PH7.6）。
2）攞1ml一次过针筒，抹得甩内肉推扞，将针筒笃用硅化嘅玻璃纤维塞住，喺针筒中装填Sephadex G-50凝胶。

いち）用3％に移転儀オキシドール真空後、水で洗い流しDEPC。
に）で洗うRNAZap多孔漏水モニターやプラスチック. DEPC水で洗い流して二度。
さん）接続真空ポンプと真空計剪取移転、ひとつの適当な大きさの膜膜の四週辺はよりプラスチック-オリフィスの5 mm）、膜トランスファーbuffer濡れご分後、置く多孔漏水-適切な位置。
よんしよ）にふたをかぶせてプラスチック.アウトライン、バックル施錠。
ご）は接着剤の余分な部分切除、切った後の接着四エッジがプラスチックパネル穴をし、少なくとも約2 mmを端漏れ防止。
6）接着剤を膜の上に置いておくと、膜と接着剤の間には気泡ができない。
ななしち）を開けて真空ポンプを維持して、圧力ごじゅう～58mbar；はすぐtransfer bufferゴム面と週りに加えて。10minゴム面でごとに加え1ml  transfer buffer、真空移転に時間。
はち）転膜後、ピンセットで捕まえる膜は、1x MOPSジェルRunning bufferの中でそっと浸し洗浄じゅう秒、殘りの接着剤と塩を取り除く。
9）水用紙で膜に余分な液体を吸収した後、UV交換器の中に膜を置く。
10）は、ゴムと紫外線を交交した膜で、紫外線の下で、移動効率を検出する。紫外線露出時間を避ける
12）膜は- 20℃で保存されます。
7 .針の製備
いち）1.5ml遠心チューブで調合する以下の反応液：
DNAテンプレート（25 ng）1ul
ランダムにPrimer 2ul
滅菌水11ul
総体積：14ul
に）95°C加熱さん分後、迅速に置いては5min冷たい。
3）離心管に以下の順序で以下の溶液を追加する。
じゅう×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq / mmol [ a-32P」dCTPごul
Exo-free Klenow Fragmentいちul
よんしよ）混合後（25ul）、37℃で反応さんじゅう分。しばらく心を離すと、溶液を収集して底を置く。
ご）65°C加熱5min酵素を失活。
8 .探知の純化及び比活性測定：
いち）の準備ゲル：1 gゲル加入30 mlの水に浸しDEPC、泊まる。DEPC水で洗浄膨張のゲル数回、溶解除去のグルカン。替えのチームＥ（PH7.6）新配合。
に取っ1ml使い捨て注射器、除去内芯ツイ守る、注射器の底で珪化のガラス繊維を、注射に装填Sephadex G-50ゲル。

1) 用3%双氧水浸泡真空转移仪后，用DEPC水冲洗。
   2) 用RNAZap擦洗多孔渗水屏和塑胶屏，用DEPC水冲洗二次。
   3) 连接真空泵和真空转移仪，剪取一块适当大小的膜（膜的四边缘应大于塑胶屏孔口的5mm），膜在Transfer buffer浸湿5分钟后，放置在多孔渗水屏的适当位置。
   4) 盖上塑胶屏，盖上外框，扣上锁。
   5) 将胶的多余部分切除，切后的胶四边缘要能盖过塑胶屏孔，并至少盖过边缘约2mm，以防止漏气。
   6) 将胶小心放置在膜的上面，膜与胶之间不能有气泡。
   7) 打开真空泵，使压强维持在50~58mbar；立即将transfer buffer加到胶面和四周。每隔10min在胶面加上1ml transfer buffer，真空转移2小时。
   8) 转膜后，用镊子夹住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中轻轻泡洗10秒，去除残余的胶和盐。
   9) 用吸水纸吸取膜上多余的液体后，将膜置于UV交联仪中自动交联。
   10) 将胶和紫外交联后的膜，在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间)
   12) 将膜在-20℃保存。
7. 探针的制备
   1) 在1.5ml离心管中配制以下反应液：
模板DNA(25 ng) 1ul
Random Primer    2ul
灭菌水     11ul
总体积：   14ul
   2) 95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。
   3) 在离心管中按下列顺序加入以下溶液：
10×Buffer     2.5ul
dNTP Mixture   2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP    5 ul
Exo-free Klenow Fragment     1 ul
   4) 混匀后（25ul），37°C下反应30分钟。短暂离心，收集溶液到管底。
   5) 65°C加热5min使酶失活。
8. 探针的纯化及比活性测定：
   1) 准备凝胶：将1g凝胶加入30ml的DEPC水中，浸泡过夜。用DEPC水洗涤膨胀的凝胶数次，以除去可溶解的葡聚糖。换用新配制的TE（PH7.6）。
   2) 取1ml一次性注射器，去除内芯推扞，将注射器底部用硅化的玻璃纤维塞住，在注射器中装填 Sephadex G-50凝胶。