星状病毒抗原ELISA试剂盒

1 、前言说明

星状病毒*次被阐述是在1975年，并根据其在电子显微镜下的星型形状而被定义为星状病毒。星状病毒属于星状病毒科，人星状病毒可以分为7种血清型。星状病毒、轮状病毒和星状腺病毒是引起5岁以下儿童非细菌性肠胃炎zui常见的病因。因此80%以上的5岁至10岁的儿童都是抗星状病毒抗体阳性个体。人们同时也发现星状病毒也会引起成年人患肠胃炎和肠胃炎引起的院内感染。疾病的过程通常都是自我调节的过程，并且持续时间相对较短。病毒潜伏一到两天后，持续一到四天的肠胃炎一般会伴随呕吐、腹泻、发烧和腹痛，zui后并引起脱水。从长年来看，星状病毒感染主要发生在冬季。人与人之间星状病毒的感染主要通过排泄物-口腔传播，或通过感染的食物来传播。感染的病人通过其粪便排泄出大量星状病毒粒子。我们可以通过电子显微镜或分子生物学的方法（如PCR技术）来检测星状病毒粒子。同时免疫学方法如酶免也是常规实验室诊断一种常用方法，因为酶免方法快、经济并且可以自动操作。

2 、应用范围

健仑公司的星状病毒抗原ELISA试剂盒可用于粪便样品中星状病毒的体外检测。在美国，此试剂盒仅供研究应用。

3 、实验原理

健仑公司的星状病毒抗原ELISA试剂盒是一种一步法的免疫检测试剂盒，整个盒子采用了一种多克隆抗体和一种单克隆抗体。将稀释好的粪便样品和HRP标记的单克隆抗星状病毒抗体加入到多克隆抗星状病毒抗体包被的微孔中。室温下温育60分钟后，洗板除去未结合的成分。之后加入可显色的TMB底物液，室温下10分钟后产生蓝色产物。加入硫酸终止酶反应，此时溶液颜色又蓝色变成黄色。zui后在450/620nm处读取OD值，样品中星状病毒的量OD值成正比。

4 、试剂盒成分

5 、试剂的准备和储存

5.1试剂盒的大小和有效期

一个盒子可用来检测96人份。

每种成分的有效期都显示在其相应的标签上，试剂盒的有效期标记在其试剂盒的外标签上。

根据要求，所的试剂盒成分必须保存在2-8℃的环境下，是能储存在其原始试剂盒中。试剂盒打开后，所有的试剂盒成分在适当的环境下可稳定储存2个月。

5.2试剂的准备

实验开始前将所有的试剂盒成分都平衡至室温。

包被板密封在含干燥剂的真空试剂袋中，包被板可拆。在打开试剂袋前将密封的包被板平衡到室温。不用的微孔应当重新密封并冷藏，避免受潮。

用蒸馏水或去离子水将浓缩的洗涤液稀释10倍，准备足够用量的洗涤液。

例如：10ml的浓缩洗涤液+90ml蒸馏水

即用型的洗涤液可在2-8℃下稳定存放30天。

确保每次洗板时，洗涤液在微孔中zui少浸泡5秒钟，并在每次洗板后将微孔内的剩余液体拍干。TMB底物液避免太阳直射。

6 、实验步骤

用样品稀释液按1：10的比例稀释样品，例如：100mg或者100ul粪便样品+1.0ml样品稀释液。试剂和样品分配时避免时间误差。

6.1操作步骤

1）  在使用前将所有的试剂都平衡到室温，混合试剂时避免气泡。

2）  在相应的微孔中分别加入2滴（或75ul）HRP酶联物和2滴（或75ul）阳性质控、阴性质控和50ul已稀释好的样品，混合均匀。

3）  盖板，室温下温育60分钟。

4）  弃去孔内反应液，每孔用300ul洗涤液洗板5次，zui后在吸水纸上拍干。

5）  在每一微孔中加入2滴（或75ul）TMB底物液。

6）  室温下避光温育10分钟

7）  在每一微孔中加入2滴（或75ul）终止液，混合均匀。

8）  加终止液后30分钟内450nm处读取OD值（参考波长620或690nm）。

7 、结果说明

定性评价

临界值的确定：阴性质控的OD+0.1

样品OD值等于或高于临界质控的样品被认为是阳性样品，样品OD值低于临界质控的样品被认为是阴性样品。

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