传染性胸膜肺炎抗体检测试剂盒标准

                            传染性胸膜肺炎抗体检测试剂盒

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猪胸膜肺炎抗体ELISA检测试剂盒说明

                                                                                                                                    临床意义

       猪接触传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌（Porcine actinobacillus pleuropneumoniae,APP）引起的一种以肺炎和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病。原称副猪嗜血杆菌病、猪嗜血杆菌胸膜肺炎。本病的广泛传播与养猪生产的集约化有着密切的关系，已成为集约化养猪临床和病理上一个独立的疾病。检测特异性猪胸膜肺炎抗体，可作为猪场胸膜肺炎疫苗的免疫监测及该病的辅助诊断。

       本试剂盒采用猪胸膜肺炎蛋白作为固相抗原，用于检测猪血清中抗抗猪胸膜肺炎IgG抗体。本试剂灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

试剂组成

1.预包被板1套;                                       6. 样本稀释液（5号液）1支;

2.酶结合物（1号液）1支;                             7. 终止液（6号液）1支;

3.洗涤液（2号液）1支;                                8. 阳性对照品1支;

4.底物（3号液）1支;                                   9. 阴性对照品1支;

5.显色剂（4号液）1支;                               10.使用说明书1份;

操作程序

·         样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:101稀释，如取5ul血清与500ul样本稀释液充分混匀；阴、阳对照不用稀释,直接加样。

·         加样反应：取出所需反应板条，样本检测孔每孔分别加已稀释样本血清100ul。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性、阳性对照各100ul分别加入反应孔内，空白对照孔仅加入100ul样本稀释液（5号液）。37℃避光反应30分钟后甩去孔内液体，每孔加洗涤液（2号液）1滴，立即用蒸馏水注满，静置30秒后甩去，再直接用蒸馏水洗涤四次，每次均静置30秒后甩去，zui后一次甩去拍干。

·         加酶反应：除空白对照孔外其余每孔加酶结合物（1号液）2滴，37℃避光反应30分钟后甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

·         显色反应：加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10分钟。加终止液（6号液）1滴，混匀，终止反应（加终止液后蓝色会变为黄色）。

结果判断

1         肉眼观察：阴性对照接近无色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。待检孔接近无色表示该标本为阴性，待检孔呈明显黄色表示该标本为阳性。

2         仪器判断：以空白对照调零用酶标仪于450nm（620nm作参比波长）读取O.D值，待检孔O.D值大于阴性对2.1倍者为阳性。当阴性对照O.D值低于0.07时按0.07计算。

注意事项

1.试剂盒在2-8℃下保存，每次取出时先平衡至室温后使用。滴瓶每次用后一定要将盖拧紧，各瓶盖之间切不可混用。各试剂盒之间不可混用。

2.洗涤时将蒸馏水加满各孔，每次停放三十秒钟后甩去孔内液体。禁用自来水等其它水源。

3.为提高试验的可比性建议使用仪器判读结果，并对阴性对照测复孔以减少误差。

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