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采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样品中的AHD含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。
1、用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。
2、用之后立即将所有试剂放回2-8℃冰箱。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。
4、所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
5、试剂及标本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
6、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
7、混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。
8、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
9、不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
10、不用的微孔板放进自封袋密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
11、显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。标准的吸光度值小于0.5时,表示试剂可能变质。
12、该试剂盒反应温度为37℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。